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215000 장쑤성 쑤저우시 쑤저우대학교 제1부속병원 감염병과 딩징누오 Tel.5년 전체 생존율이 14.1%인 소화기 계통의 종양.많은 간세포암종 환자가 진행된 단계에서 진단되기 때문에 간세포암종으로 인한 사망률을 줄이기 위해서는 조기 검진이 필수적입니다.혈청 알파태아단백(AFP), 수정체 렉틴 반응성 알파태아단백(AFP-L3), 비정상 프로트롬빈(비타민 K 결핍 유발 단백질 II, PIVKA-II) 등 일반적으로 사용되는 검출 지표 외에 수액 생검 기법 HCC의 검출에 진단적 가치가 있는 것으로 나타났습니다.침습적 절차와 비교하여 유체 생검은 순환하는 악성 대사 산물을 감지할 수 있습니다.유체 생검 기술은 순환하는 종양 세포, 순환하는 종양 DNA, 순환하는 RNA 및 엑소좀을 검출하고 HCC의 조기 스크리닝, 진단 및 예후 평가에 사용됩니다.이 기사는 고위험 HCC 그룹의 조기 스크리닝을 개선하기 위해 HCC의 조기 평가를 위한 실행 가능한 옵션일 수 있는 유망한 바이오마커를 분리하기 위한 분자 생물학 및 다양한 유체 생검 기술의 적용을 검토합니다.키워드: 수액생검법, 간세포암종, 고위험군 .
간세포 암종(HCC)은 소화관의 흔한 악성 종양으로 남녀 모두에서 신규 악성 종양 사례 중 6위를 차지합니다.1 전 세계적으로 간암은 폐암 및 결장직장암에 이어 암 사망의 세 번째 주요 원인이며 모든 악성 신생물로 인한 암 관련 사망의 8.3%를 차지합니다.1 간세포암종의 예후는 진단 단계와 밀접한 관련이 있습니다.간세포암종에서 생존율이 낮은 주요 원인은 간내 전이, 문맥 정맥 종양 혈전, 절제가 불가능한 원격 전이이며, 이러한 특징 중 다수는 진단 당시 환자에게 이미 존재한다.
진단 및 치료 지침에 따르면 간세포암종 발병의 주요 위험인자는 간경화, 만성 B형 간염 바이러스(HBV) 또는 C형 간염 바이러스(HCV) 감염, 알코올성 지방간 질환, 비알코올성 지방간 질환(NAFLD)입니다. ).2 또한 간세포암종의 위험인자에는 아플라톡신에 오염된 음식 섭취, 주혈흡충증, 간경변증의 기타 원인, 간암 가족력, 당뇨병, 비만, 흡연, 약물 유발 간 손상 등이 있습니다.35세 및 45세 고위험군은 정기적인 건강 검진을 받아야 합니다.조기 검진은 간세포암종 환자의 전체 생존율을 향상시키는 중요한 조기 치료 전략입니다.
AFP, AFP-L3 및 PIVKA-II와 같은 바이오마커는 HCC3,4의 조기 스크리닝에 권장됩니다.액체 생검 기술은 조기 진단 및 치료 평가에서 유망한 결과를 보여주었습니다.5,6 AFP와 같이 일반적으로 사용되는 혈청 마커보다 더 높은 민감도와 특이성을 가질 수 있는 HCC 액체 생검에서 상당한 진전이 있었습니다(표 1).
AFP는 HCC에서 널리 사용되는 바이오마커이며 현재 질병의 조기 스크리닝, 진단 및 평가에 널리 사용되는 가장 상세한 바이오마커입니다.지속적으로 상승된 AFP 수치는 HCC 진행의 위험 인자로 간주됩니다.7,8 소간세포암(sHCC)의 검출률은 초음파 및 컴퓨터 단층촬영의 발달로 증가하고 있으며 AFP는 임상 실습에서 hHCC의 검출에 특히 둔감한 것으로 밝혀졌습니다.후향적 다기관 연구9에 따르면, AFP 양성은 HCC 사례의 46%(616/1338), sHCC 사례의 23.4%(150/641)에서 발견되었습니다.또한, AFP 수치는 만성 간 질환 및 간경변증 환자에서 상승합니다.10 따라서 AFP는 sHCC에 대한 선별 효과가 제한적입니다.11 간세포 암종에 대한 아시아 태평양 임상 진료 지침에 따르면 AFP의 사용은 권장되지 않습니다.12 임상 증거에 따르면 PIVKA-II가 AFP보다 HCC 치료에 우수하고 PIVKA-II와 AFP의 조합이 HCC에서 더 높은 진단 값.13 조직 생검에 비해 체액 생검은 주로 체액(혈액, 타액, 흉막액, 뇌척수액 또는 소변)에서 종양 관련 대사 산물을 감지하고 조직에 덜 침습적입니다.14 또한, 액체 생검은 원발성 종양 조직에 존재하지 않는 악성 특징을 반영할 수 있습니다.15 액체 생검은 모든 유형의 종양에 대한 임상 실습에서 아직 테스트되지 않았지만 암에서 진단 가능성이 종양 전문의의 관심을 끌고 있습니다.16 유체 생검은 순환 종양 세포(CTC), 순환 종양 DNA(cDNA), 순환 유리 RNA(ecRNA) 및 엑소좀을 검출할 수 있습니다.이 기사에서는 고위험 간세포암종의 조기 선별에서 다양한 체액 생검 기술의 특성, 역할 및 적용에 대해 논의할 것입니다.
건강한 개인의 혈액 샘플에 있는 세포외 DNA(cfDNA)는 1948년 Mandel et al.17 cfDNA는 약 160-180bp 길이의 무세포 DNA 단편으로 주로 림프구와 골수 세포에서 유래합니다.ctDNA는 종양 세포가 말초 혈액으로 방출하는 특정 돌연변이 DNA 단편으로, 괴사, 세포자멸사 및 배설을 포함한 특정 병태생리학적 과정 후에 종양 세포의 게놈 정보를 나타냅니다.전체 cfDNA에서 ctDNA의 비율은 종양 유형에 따라 크게 다르며, cDNA 단편은 일반적으로 길이가 167bp 미만인 것으로 보고됩니다.18 Underhill의 연구에 따르면 cfDNA 단편은 일반적으로 정상 cfDNA보다 짧습니다.19 건강한 사람에 비해 암 환자의 혈액에서 cfDNA 단편의 전체 길이는 더 짧기 때문에 cfDNA는 조기 종양 스크리닝의 지표로 사용될 수 있습니다.cfDNA 단편 길이의 특정 하위 집합을 강화하면 비전이성 고형 종양과 관련된 cDNA의 검출을 향상시킬 수 있습니다.연구에 따르면 ctDNA는 진행된 췌장암, 결장암, 방광암, 위장암, 간암, 난소암, 유방암, 흑색종암, 두경부암의 75% 이상에서 발견됩니다.20,21 그러나 혈액 내 ctDNA의 양은 종양의 위치에 따라 다릅니다.22 Bettegoud의 연구에서 결장직장암, 유방암, 간암, 폐암 및 전립선암 환자는 다른 암보다 혈액 내 cDNA 수치가 더 높은 것으로 나타났습니다.반면 구강암, 췌장암, 위암, 신경교종 환자에서는 혈액 내 cDNA 농도가 더 낮았다.이십 일
ctDNA는 원발성 종양 세포와 동일한 유전적 돌연변이를 포함하기 때문에 cDNA는 메틸화, 히드록시메틸화, 단일 뉴클레오티드 변이 및 복제 수 변이를 비롯한 이질적인 종양 특이적 돌연변이 및 후성 유전적 변화를 감지하는 데 사용할 수 있습니다.이십 삼
DNA 메틸화는 유전자 억제를 초래하는 가장 흔한 후성 유전적 변화 중 하나입니다.정상 세포와 비교하여 종양 세포 게놈의 전반적인 메틸화 수준, 특히 초기 단계에서 감지할 수 있는 종양 억제 유전자의 메틸화 수준에 차이가 있어 DNA 메틸화의 변화가 조기 진단의 지표가 될 수 있음을 시사합니다. 종양 형성의 검출.HCC와 관련된 종양 억제 유전자는 프로모터 메틸화에 의해 비활성화되어 종양 형성을 자극할 수 있습니다.24 DNA 메틸화는 조직 특이성, 검출 가능성 및 연령 독립성으로 인해 종양의 조기 진단에 이상적인 마커입니다.또한, DNA 메틸화는 표적 게놈의 각 영역에 더 많은 표적 영역과 여러 개의 변경된 CpG 부위가 있기 때문에 체세포 돌연변이에 비해 더 일반적입니다.25 여러 CpG 부위 외에도 DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 및 RGS10.26 Xu et al.1098명의 HCC 환자와 835명의 건강한 대조군의 cfDNA 샘플을 비교한 결과, HCC와 관련된 유전자가 해당 혈장 cDNA 메틸화 특징과 강한 상관관계가 있는 것으로 밝혀졌습니다.25 실험실 분석을 기반으로 하여 민감도 및 특이도가 각각 85.7% 및 94.3%인 10개의 메틸화 마커를 포함하는 예측 모델이 개발되었으며 이러한 마커는 종양 질량, 종양 병기 및 치료에 대한 반응과 높은 상관관계가 있었습니다.이러한 결과는 cDNA 메틸화 마커의 사용이 간세포암종의 진단, 모니터링 및 예후에 큰 가능성이 있음을 나타냅니다.Lu et al27이 제시한 3개의 비정상적으로 메틸화된 유전자(APC, COX2, RASSF1A)와 1개의 miRNA(miR203)로 구성된 메틸화 모델에서 HBV 관련 HCC 진단을 위한 모델 27의 민감도와 특이성은 비슷했습니다.80%.또한 이 모델은 AFP 수준이 20ng/mL인 진단되지 않은 간세포암종 환자의 75%를 감지할 수 있습니다.Ras 관련 도메인 패밀리 1A 단백질(RASSF1A)에 대한 유전자는 인간 게놈에서 주요 반복 DNA 서열입니다.Araujoet al.RASSF1A 프로모터의 과메틸화는 HCC의 조기 스크리닝을 위한 귀중한 바이오마커이자 후성유전학적 치료를 위한 잠재적인 분자 표적이 될 수 있다고 결론지었습니다.28 한 연구에서 HCC 환자의 73.3%에서 혈청 RASSF1A 프로모터 과메틸화가 발견되었습니다.29 긴 산재된 뉴클레오티드 요소 1(LINE-1)은 또 다른 고도로 활성인 역전위 매개체입니다.LINE-1의 저메틸화는 간세포암종 혈청 샘플의 66.7%에서 발견되었으며 근치적 절제술 후 조기 재발 및 불량한 생존과 관련이 있었습니다.29 과메틸화는 간경변과 HCC의 발병에 독특한 역할을 하는 일반적인 유전적 과정입니다.30 대조적으로, hydroxymethylation은 유전자 재활성화와 발현을 유도하는 demethylation 과정이며, 이 과정에서 5-hydroxymethylcytosine(5-hmC) 생성물의 검출은 종양을 식별하는데 사용될 수 있다.cDNA의 메틸화 및 하이드록시메틸화는 종양 형성과 관련이 있으며 HCC의 조기 스크리닝에 기여할 수 있습니다.2,554명의 피험자를 대상으로 한 연구에서, cfDNA 샘플에서 31개의 게놈 전체 5-hmC가 발견되었으며, 32개의 유전자가 간세포암종 환자와 만성 질환 환자와 같은 고위험군에서 5-hmC 서열을 비교하여 확인되었습니다.간 질환의 진단 모델.및 간경변.이 모델은 비종양 조직과 HCC를 구별하는 데 있어 AFP보다 우수했습니다.
코딩 영역의 돌연변이는 전사 이상을 유발할 수 있으며, 이는 단백질 서열의 변화와 궁극적으로 암을 유발할 수 있습니다.단일 뉴클레오티드 변이체는 높은 조직 신뢰성과 높은 종양 및 조직 특이성으로 인해 조기 종양 스크리닝을 위한 중요한 게놈 마커입니다.암의 엑솜 및 전체 게놈 시퀀싱을 위해 차세대 시퀀싱(NGS)을 사용하는 수많은 HCC 관련 연구에서 TP53 및 CTNNB1과 같은 일반적인 돌연변이 세포 유전자와 ARID1A, MLL, IRF2를 비롯한 여러 유전자가 확인되었습니다.새로운 유전자인 ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 및 JAK1은 중간 정도의 돌연변이율을 보입니다. 돌연변이 유전자 기능 분석은 염색질 리모델링, Wnt/β-카테닌 및 JAK/STAT 신호 전달, P53-세포 주기 경로, 후성유전적 변형자, 산화 스트레스 경로, PI3K/AKT/MTOR 경로 및 RAS/RAF/ MAPK 키나아제 경로는 간세포암종 종양 발생에서 중요한 역할을 합니다.32,33 종양 관련 돌연변이가 검출된 연구에서 Huang 등은 ctDNA에 의존하는 종양 관련 돌연변이의 빈도가 19.5%이고 특이도가 90%임을 발견했습니다. .34 또한, 혈관 침범을 경험한 환자는 ctDNA 돌연변이를 가질 가능성이 더 높았고(P=0.041) 무재발 생존 기간이 더 짧았습니다(P<0.001). 돌연변이 유전자 기능 분석은 염색질 리모델링, Wnt/β-카테닌 및 JAK/STAT 신호 전달, P53-세포 주기 경로, 후성유전적 변형자, 산화 스트레스 경로, PI3K/AKT/MTOR 경로 및 RAS/RAF/ MAPK 키나아제 경로는 간세포암종 종양 발생에서 중요한 역할을 합니다.32,33 종양 관련 돌연변이가 검출된 연구에서 Huang 등은 ctDNA에 의존하는 종양 관련 돌연변이의 빈도가 19.5%이고 특이도가 90%임을 발견했습니다. .34 또한, 혈관 침범을 경험한 환자는 ctDNA 돌연변이를 가질 가능성이 더 높았고(P=0.041) 무재발 생존 기간이 더 짧았습니다(P<0.001).돌연변이 유전자 기능 분석은 염색질 리모델링, Wnt/β-카테닌 및 JAK/STAT 신호전달, P53 세포 주기 경로, 후성유전적 변형자, 산화 스트레스 경로, PI3K/AKT/MTOR 경로 및 RAS/RAF/MAPK 키나제 경로의 변화가 작용함을 시사합니다. HCC 종양 형성에서 중요한 역할.32,33 종양 관련 돌연변이를 발견한 연구에서 Huang et al.ctDNA 의존성 종양 관련 돌연변이의 빈도는 19.5%이고 특이성은 90%임을 발견했습니다..34 Кроме того, у пациентов с сосудистой инвазией чаще встречались мутации цДНК (P=0,041) и бол .34 또한, 혈관 침범이 있는 환자는 cDNA 돌연변이가 더 많았고(P=0.041) 무병 생존 기간이 더 짧았습니다(P<0.001).돌연변이 유전자의 기능 분석은 염색질 리모델링, Wnt/β-카테닌 및 JAK/STAT 신호전달, P53 세포 주기 경로, 후성유전적 변형자, 산화 스트레스 경로, PI3K/AKT/MTOR 경로 및 RAS/RAF/MAPK를 밝혀냈습니다. 키나제 경로는 간세포암종의 발암에 중요한 역할을 합니다. 32,33 3 一 项 项 检测 到 肿瘤 肿瘤 相关 相关 突变 研究 研究 中 中 中 中 中 中 中 中 中 中 等 等 人 人 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 依赖于 ctdna 的 频率 19.5%, 特异性 90% .34 此外 经历 经历 侵犯 侵犯 的 患者 更 更 有 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 ctdna突变（P=0.041）和更短的无复发生存期（P<0.001）。 32.33 在 3 3 项 检测 到 相关 相关 突变 的 研究 研究 研究 研究 研究, Huang 等 发现 发现 肿瘤 相关 相关 突变 依赖于 ctdna 的 为 为 为 为 为 为 为 为 特异性 发生 更 可能 可能 可能 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 ctdna 突变 (p = 0.041) 更 更 侵犯 血管 血管 血管.短的无复发生存期（P<0.001）。32,33 종양 관련 돌연변이를 발견한 연구에서 Huang et al.종양 관련 돌연변이가 cDNA에 19.5% 의존적이며 특이도는 90%인 것으로 나타났습니다.мутация (P = 0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). 돌연변이(P=0.041) 및 더 짧은 무병 생존(P<0.001).또 다른 일반적인 HCC 드라이버 유전자는 30% 이상의 돌연변이율을 갖는 TP53입니다.연구에 따르면 혈액과 소변의 ctDNA에서 TP53 돌연변이의 빈도는 5~60%입니다.35 Johan의 연구에 따르면 후기 간세포암종의 ctDNA 돌연변이 스펙트럼은 TERT 프로모터(51%), TP53(32%), CTNNB1(17%), PTEN(8%), AXIN1 ., ARID2, KMT2D 및 TSC2(각각 6%).36 β-카테닌(CTNNB1) 종양유전자는 Wnt 신호전달 경로에서 중요한 역할을 합니다.전사 보조 활성화제 CTNNB1은 유전자 발현을 촉진하여 세포 증식, 세포자멸사 억제 및 혈관신생을 유발할 수 있습니다.CTNNB1은 또한 TERT와 상호작용하여 간세포 변형을 유도할 수 있습니다.33 일부 고형 종양에서는 TERT 프로모터가 자주 돌연변이됩니다.HCC의 악성 형질전환에서 가장 초기의 유전적 변화 중 하나인 TERT의 변형은 간경변성 간세포에서 텔로머라제 재활성화로 이어질 수 있으며 증식을 촉진하고 노화를 예방할 수 있습니다.33-37 TERT 프로모터의 돌연변이는 증식성 간 결절 및 초기 HCC 환자의 59-90%에서 발생하는 것으로 보고되었으며 생존과 관련이 있습니다.38
복제 수 변경(CNA)은 체세포 돌연변이의 중요한 하위 유형입니다.연구에 따르면 CNA의 광범위하고 집중적인 부담은 일부 유형의 암에서 종양 면역 침윤 및 배제를 예측할 수 있는 게놈 서명입니다.39 활성 침윤 신호, 높은 세포용해 활성, 중증 염증 및 HCC의 항원 제시와 관련된 유전적 마커.477명의 피험자에서 단일 뉴클레오티드 다형성의 데이터 배열을 분석한 결과 CNS에 대한 부담이 낮은 것으로 나타났습니다.대조적으로, 높은 광범위한 CNA 부하를 갖는 염색체 불안정한 종양은 면역 거부의 징후를 보였고 증식, DNA 복구 및 TP53 기능 장애와 관련이 있었습니다.Xu et al.HCC 그룹이 만성 간 질환 그룹보다 더 높은 CNA 점수를 보였다.40 단일 세포의 전체 게놈 시퀀싱을 사용하여 CNA는 간암 발생 초기에 나타나고 종양 진행 중에 비교적 안정적으로 유지되는 것으로 밝혀졌습니다.41 Chung et al.는 cfDNA 수준이 간세포암종 환자에서 유의하게 증가했으며 cfDNA의 전체 게놈 CNA가 소라페닙으로 치료받은 간세포암종 환자에서 중요한 독립적인 예후 마커라는 것을 발견했습니다.42 CNA 부담이 높은 환자는 CNA 부담이 낮은 환자보다 질병 진행 및 사망 가능성이 더 높았습니다.Ollerich et al.CNI(copy number instability index)가 암 환자의 cfDNA에서 CNA를 평가하는 데 사용될 수 있음을 발견했습니다.그들은 진행성 암 환자가 전신 화학 요법 및 면역 요법에 대한 환자 반응을 평가하는 대조군보다 유의하게 더 높은 CNI 점수를 가졌다는 점에 주목했습니다.43 이러한 결과는 액체 생검 표본에서 발견된 CNA가 진행성 암 환자의 예후 지표 역할을 할 수 있음을 시사합니다.전신 치료의 배경에 HCC.
현재 ctDNA를 검출하기 위해 사용되는 방법은 표적화 방법과 비표적화 방법으로 나눌 수 있다.간단히 말해서, 디지털 중합효소 연쇄 반응(dPCR), BEAMing 디지털 PCR, Amplification Refractory Mutation System-PCR, Capp-Seq 및 Tam-Seq와 같은 표적 방법은 미리 정의된 유전자에 매우 민감합니다.전체 게놈 시퀀싱 및 NGS와 같은 표적 외 방법은 전체 게놈 환경에 대한 포괄적인 관점을 제공합니다.44 타겟 패널과 비교하여 전체 게놈 시퀀싱은 점 돌연변이 및 삽입뿐만 아니라 재배열 및 복제 수 변이도 감지할 수 있습니다.예후, CTC 및 cfDNA는 HCC의 동적 모니터링에 사용할 수 있는 좋은 지표입니다.45 또한, cfDNA 분석은 간세포암종 검출에 더 유용할 수 있습니다.Yanet al.간세포암종 환자의 혈장 내 cfDNA가 간 섬유증 환자 및 건강한 대조군보다 유의하게 높다는 것을 보여주었습니다.AFP와 비교하여 ctDNA는 초기 HCC에 대한 더 나은 스크리닝 마커가 될 것으로 예상됩니다.46 모집단에서 cfDNA와 단백질을 테스트한 47개의 액체 생검에 대한 전향적 연구에서, HCC가 있는 환자와 HCC가 없는 환자를 구별하는 데 효과적인 것으로 나타났습니다.331명의 초음파 정상 및 AFP 음성 환자의 추적 조사에서 간세포암종 진단을 위한 cfDNA의 민감도 및 특이도는 각각 100% 및 94%로, cDNA는 무증상 HBsAg 혈청 양성 개체에서 간세포암종을 검출할 수 있었습니다.Yeo48 연구에서 HCC 환자에서 RASSF1A 프로모터의 과메틸화가 높은 빈도(92.5%)로 발견되었습니다.또한 Xu et al.특이도와 민감도가 각각 90.5%와 83.3%인 특정 메틸화 마커 패널을 사용하여 간세포암종을 예측하는 진단 모델을 만들었습니다.이 패널을 통해 간세포암종 환자는 AFP보다 우수한 다른 간 질환 환자와 구별할 수 있습니다.그들은 또한 양성 반응을 보인 정상 대조군이 HBV 감염이나 알코올 사용 이력과 같은 HCC에 대한 위험 요소를 가질 수 있음을 발견했습니다.25 우리는 HCC에 대한 고위험 인자가 cfDNA의 과메틸화를 촉진할 수 있으며, 이는 HCC의 진행에 기여하므로 cfDNA가 고위험군을 선별하는 데 핵심 역할을 할 수 있다고 가정합니다.Cai et al.전체 범위의 ctDNA 돌연변이를 요약하고 환자의 종양 부담을 평가하기 위한 강력한 전략을 제공합니다.49 이 전략은 영상 변화 전 중앙값 4.6개월에 종양 형성을 식별할 수 있으며 혈청 바이오마커 AFP, AFP-L3 및 PIVKA-II에 비해 우수한 진단 성능을 보여주었습니다.이미지 평가가 불가능할 때 cDNA 검사의 진단적 가치가 입증되었으므로 cDNA 검사는 고위험군에서 조기 간세포암종 진단에 가치가 있습니다.최근 과학자들은 NGS 기술을 사용하여 3204개의 임상 샘플 및 cfDNA에서 다변량 유전적 변이(5-하이드록시메틸시토신, 5'-모티프, 단편화, 뉴클레오솜 추적, HIFI 포함)의 지표를 분석했습니다.50 3개의 독립적인 트레인, 테스트 및 테스트 세트가 있는 재검증된 HIFI 모델은 HCC 특정 테스트 및 테스트 세트에서 각각 95.79% 및 95.42% 감도로 HCC 및 비 HCC 모집단 간에 안정적이고 신뢰할 수 있는 식별을 보여주었습니다.성별은 각각 95.00%와 97.83%였다.HIFI 방법의 진단 값은 간경변과 HCC를 구별하는 AFP보다 높습니다.또한 ctDNA는 외과적 치료에도 사용됩니다.Atsushi et al.간세포암종 환자의 수술 전 혈청 ctDNA 수치를 측정한 결과 cDNA 양성군이 cDNA 음성군보다 재발률과 간외전이율이 유의하게 높았고 cDNA 수치도 유의한 상관관계가 있는 것으로 나타났다.종양 진행과 함께.51 매우 민감한 바이오마커인 ctDNA는 HCC가 혈관을 침범하는 능력을 예측할 수 있습니다.Wang et al.HCC 환자 46명을 대상으로 전체 게놈 시퀀싱을 수행한 결과, 다변량 분석에서 cDNA 변이체의 미세혈관 침윤에 대한 대립유전자 빈도의 역치는 0.83%, 민감도 89.7%, 특이도 80.0%로 나타났다.절제 가능한 간세포암종에서 미세혈관 침범에 대한 독립적인 위험 인자로, cDNA가 최적의 치료를 안내하는 데 도움이 될 수 있음을 시사합니다.결론적으로, ctDNA는 간세포암종의 발생과 발달에 완전히 관련되어 있으며 조기 검진, 외과적 평가 및 질병 모니터링에 사용될 수 있습니다.
CTC는 혈류로 전이되는 원발성 종양 또는 전이에서 유래된 악성 세포입니다.종양 세포는 기저막을 분해하는 기질 금속단백분해효소(MMP)를 분비하여 종양 세포가 혈액과 림프관으로 직접 들어갈 수 있도록 합니다.그러나 대부분의 CTC는 아노이키, 면역 공격 또는 전단 응력에 의해 빠르게 제거됩니다.53 상피-중간엽 전이(EMT)는 CTC가 원발성 종양 조직에서 쉽게 분리되고 모세혈관을 침범하며 현저하게 개선된 생존, 전이, 침습성 및 약물 내성을 얻을 수 있도록 합니다.연구에 따르면 원발성 전이성 종양의 다양한 종양 세포 사이에는 심각한 이질성이 있습니다.따라서 CTC 분석은 종양 세포 이질성에 대한 포괄적인 이해로 이어질 수 있습니다.54
HCC 관련 CTC에 대한 특정 마커에는 글리피칸-3(GPC3), 아시알로당단백질 수용체(ASGPR), 상피 세포 접착 분자(EpCAM) 및 줄기 세포 관련 마커(예: CD44, CD90, 55 및 세포간 접착 분자 1(ICAM1))가 포함됩니다.) .56 GPC3 마커는 HCC의 병리학적 분석 및 특성화에 임상적으로 사용되는 세포막 고정 단백질입니다.57 GPC3의 발현은 중간 및 낮은 분화를 가진 간세포암종 종양 세포에서 더 일반적이며 간외 이동을 촉진합니다.또한 GPC3+ CTC의 존재는 전이성 HCC를 나타냅니다.58 ASGPR은 간세포 표면에서만 발현되는 막관통 단백질로 잘 분화된 간세포암종에서 높게 발현된다.EpCAM은 CTC를 포착하기 위해 가장 일반적으로 사용되는 막 관련 단백질 중 하나입니다.EpCAM은 바르셀로나 병원(BCLC)에서 혈관 침습, 평가된 AFP 수준 및 간암의 진행 단계와 같은 HCC의 다양한 임상병리학적 특징과 상관관계가 있는 줄기 세포 특성59을 갖는 HCC 세포의 표면 마커로 확인되었습니다.60 CTC EMT 표현형은 고도로 전이성입니다.CTC의 54 EMT 과정은 HCC 전이를 촉진합니다.vimentin, twist, E-box Zinc finger binding (ZEB) 1, ZEB2, snail, slug 및 E-cadherin과 같은 EMT 마커의 발현은 HCC 환자의 간 유래 CTC에서 연구되었습니다.58 Cheng[61]이 개발한 CanPatrol™ 시스템은 CTC를 주로 발현되는 마커에 따라 세 가지 표현형 하위 그룹으로 분류했습니다: 상피 표현형(EpCAM, CK8/18/19), 중간엽 표현형(vimentin, 코일형) 및 혼합 표현형.176명의 환자에서 총 CTC는 양성 간 질환과 HCC를 구별하는 데 AFP보다 우수했습니다.총 CTC, AFP 및 결합된 총 CTC 및 AFP에 대한 AUC 값은 0.774(95% CI, 0.704–0.834), 0.669(95% CI, 0.587–0.750) 및 0.821(95% CI, 0.885)이었습니다. ).), 각각.EMT에 기반한 CTC 분류는 간세포암종 진단, 조기 재발, 전이 및 더 짧은 전체 시간을 예측할 수 있습니다.
현재 CSC를 검출하는 방법에는 물리적 방법과 생물학적 방법이 있습니다.생물물리학적 특성에 기반한 농축이라고 하는 물리적 방법은 주로 크기, 밀도, 전하, 이동성 및 변형성과 같은 CSC의 물리적 특성에 따라 달라집니다.물리적 특성에 따라 여과 기반 시스템, 유전 영동 등과 같은 다양한 방법이 있습니다. 면역 친화성 기반 농축으로도 알려진 후자는 방법이 종양 특이적 바이오마커에 대한 항체를 사용하기 때문에 주로 항원-항체 결합을 기반으로 합니다. EpCAM, ASGPR, 인간 표피 성장 인자 수용체 2(HER2), 전립선 특이적 항원(PSA), 인간 판사이토케라틴(P-CK) 및 카바모일 포스페이트 신타제 1(CPS1)과 같은.62 무농축 방법(no-enrichment method)이라고 하는 또 다른 유형은 유세포 분석을 사용하여 더 높은 핵 대 세포질 비율과 크기를 기반으로 백혈구에서 CTC를 구별합니다.현재 CTC 검출을 위해 FDA 승인을 받은 유일한 테스트는 EpCAM 세포 표면 마커를 사용하는 Cell-Search™ 시스템입니다. 그러나 결합된 마커 기반 CTC 검출은 양성률을 증가시킬 수 있습니다.54 ASGPR 및 CPS1에 대한 항체의 혼합물은 HCC 환자에서 91%의 CTC 검출률을 달성했습니다.63 Zhang 등은 ASGPR, P에 대한 항체와 함께 CTC-칩을 사용했습니다. -CK 및 CPS1, 간세포암종 환자를 양성 간 질환 또는 비간세포암종 환자와 100%의 비율로 구별했습니다.64 Wang의 연구에 따르면 42명의 간세포암종 환자 중 60%에서 EpCAM+ CTC가 검출되었으며 두 양성 간 유의한 상관 관계가 발견되었습니다. TNM 병기가 있는 CTC의 수와 비율.65 Guo et al은 AFP 수준이 20ng/mL 미만이고 민감도가 72.5%이고 95.0%의 특이도와 비교하여 컷오프 20ng/mL에서 AFP의 경우 57.0% 및 90.0%입니다.66 AFP와 CTC의 조합은 HCC 검출을 향상시킬 수 있습니다.45 CTC는 그룹의 조기 스크리닝에서 AFP보다 이점이 있다고 믿어집니다. HCC에 대한 고위험. 그러나 결합된 마커 기반 CTC 검출은 양성률을 증가시킬 수 있습니다.54 ASGPR 및 CPS1에 대한 항체의 혼합물은 HCC 환자에서 91%의 CTC 검출률을 달성했습니다.63 Zhang 등은 ASGPR, P에 대한 항체와 함께 CTC-칩을 사용했습니다. -CK 및 CPS1, 간세포암종 환자를 양성 간 질환 또는 비간세포암종 환자와 100%의 비율로 구별했습니다.64 Wang의 연구에 따르면 42명의 간세포암종 환자 중 60%에서 EpCAM+ CTC가 검출되었으며 두 양성 간 유의한 상관 관계가 발견되었습니다. TNM 병기가 있는 CTC의 수와 비율.65 Guo et al은 AFP 수준이 20ng/mL 미만이고 민감도가 72.5%이고 95.0%의 특이도와 비교하여 컷오프 20ng/mL에서 AFP의 경우 57.0% 및 90.0%입니다.66 AFP와 CTC의 조합은 HCC 검출을 향상시킬 수 있습니다.45 CTC는 그룹의 조기 스크리닝에서 AFP보다 이점이 있다고 믿어집니다. HCC의 위험이 높습니다.그러나 마커 기반 CTC의 결합 검출은 양성 결과의 백분율을 증가시킬 수 있습니다.54 항-ASGPR 및 CPS1 항체의 혼합물은 HCC 환자에서 91%의 CTC 검출율을 달성했습니다.63 Zhang et al.ASGPR, P-CK, CPS1에 대한 항체가 포함된 CTC-Chip을 사용하여 간세포암종 환자와 양성 간질환 환자 또는 비간세포암종 환자를 100%의 비율로 구별하였다.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге ㅍㅍㅅㅅ TNM 병기가 있는 CTC의 빈도 및 수.65 Guo et al은 AFP 수준이 20ng/mL 미만이고 민감도가 72.5%이고 20ng/mL의 컷오프 수준에서 AFP의 경우 57.0% 및 90.0%에 비해 95.0%입니다.66 AFP와 CTC의 조합은 간세포암종의 검출을 향상시킬 수 있습니다.45 CTC는 조기 스크리닝에서 AFP보다 유리한 것으로 간주됩니다. 여러 떼.HCC의 위험이 높습니다.그러나 마커 기반 CTC의 결합 검출은 양성 결과의 비율을 증가시킬 수 있습니다.54 항-ASGPR과 CPS1 항체의 혼합물은 간세포암종 환자에서 91%의 CTC 검출률을 달성했습니다.63 Zhang et al.ASGPR, P-CK 및 CPS1에 대한 항체가 포함된 CTC 칩을 사용하고 HCC 환자를 양성 간 질환과 100%로 비간세포암종으로 구분했습니다.64 Wang의 연구에서는 42명의 간세포암종 환자에서 EpCAM+ CTC의 60%를 확인했으며 TNM 단계에서 발생률과 CTC 수 사이에 상당한 상관관계가 있음을 발견했습니다. 65 Guo 等人发现，在AFP 水平<20 ng/mL 的125/171 (73%) 名患者中，CTC 衍生的PCR 评分升高，敏感性为72.5%，特异性丹值为20ng/mL 时的特异性为57.0% 和90.0%。 65 GUO 等 o 发现 在 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者 患者, CTC 衍生 PCR 评分, 敏感性 为 72.5%, 为 95.0%, afp 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 20ng/ml 时 特异性 特异性 为 为 57.0% 和 90.0%。65 Guo et al.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. AFP 수치가 <20ng/mL인 환자 125/171명(73%)에서 CTC 유래 PCR 값이 72.5%의 민감도와 95.0%의 특이도로 상승한 반면 AFP는 컷오프 특이도에 있음을 발견했습니다. 20ng/mL였다.ml는 57.0% 및 90.0%였다.66 ORP와 CTC의 조합은 HCC의 검출을 향상시킵니다.45 CTC는 고위험 간세포암종 집단의 조기 스크리닝에서 AFP보다 우수한 것으로 생각됩니다.따라서 CTC 양성 및 고위험 간세포암종 그룹의 경우 CTC 검사는 정기적으로 초음파 및 AFP 검출과 결합되어야 합니다.그러나 CTC는 종양 전이 및 재발의 중요한 예측 인자로 간주되며 CTC의 검출은 진단 도구로 독립적으로 권장되지 않습니다.62 따라서 CTC는 현재 사용되는 다른 표지자보다 더 나은 예측 바이오마커 역할을 할 수 있습니다. Zhou et al은 높은 수의 EpCAM+ CTC와 조절 T 세포를 가진 환자가 66.7% 대 10.3%의 재발률로 낮은 수의 CTC를 가진 환자보다 HCC 재발 발병 위험이 더 높다는 것을 발견했습니다(P < 0.001).67 Zhong et al.68에 의해 유사한 연구가 보고되었습니다. 또한 Qi는 초기 질환을 포함하여 간세포암종 환자 112명 중 101명(90.81%)이 CTC에 양성이었고 3회 후에 매우 작은 간세포암종 결절이 발견되었음을 발견했습니다. 추적 관찰 5개월까지. Zhou et al은 높은 수의 EpCAM+ CTC와 조절 T 세포를 가진 환자가 66.7% 대 10.3%의 재발률로 낮은 수의 CTC를 가진 환자보다 간세포암종의 재발 발병 위험이 더 높다는 것을 발견했습니다(P < 0.001).67 A Zhong et al.68에서도 유사한 연구가 보고되었습니다. 또한 Qi는 초기 질환을 포함한 간세포암종 환자 112명 중 101명(90.81%)이 CTC에 양성이었고 3~3일 후에 매우 작은 간세포암종 결절이 발견되었음을 발견했습니다. 추적 관찰 5개월. Чжоу и др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou et al은 EpCAM+ CTC와 조절 T 세포가 상승한 환자는 CTC가 낮은 환자보다 간세포암종의 재발 위험이 더 높았으며, 재발률은 66.7% 대 10.3%(P<0.001)67입니다.Zhong et al.에 의해 유사한 연구가 수행되었습니다.68. 또한, Qi는 초기 질병을 포함하여 간세포암종 환자 112명 중 101명(90.81%)이 암종양을 갖고 있으며, 추적관찰 3~5개월 후에 매우 작은 간세포암종 결절이 발견되었음을 발견했습니다. Zhou 等人发现, 与CTC 数量较少的患者相比, EpCAM+ CTC 和调节性T 细胞数量升高的患者发生HCC Zhou 人 等 发现 与 与 与 ctc 数量 数量 少 的 患者 相比 相比 相比 相比 相比 相比 相比 相比 相比 相比 相比 相比 相比 相比 相比 相比 相比 患者 患者 患者 发生 发生 发生 hcc 复发 风险 更 更 更 更 更 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10.3% (10.3%). p <0.001)。。。。。。。。。。。。。。。。 Чжоу и др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou et al.EpCAM+ CTC 및 조절 T 세포가 높은 환자는 CTC가 적은 환자에 비해 간세포암종의 재발 위험이 더 높았으며 재발률은 각각 66.7% 및 10.3%였습니다(P < 0.001).Zhong et al.에 의해 유사한 연구가 보고되었습니다.68 또한, Qi는 초기 질병 환자를 포함하여 112명의 간세포암종 환자 중 101명(90.81%)이 CTC 결과 양성이었고 3회 방문 후 매우 작은 간세포암종 결절을 발견했음을 발견했습니다.5개월까지 관찰.그들은 또한 만성 HBV 감염 환자 12명에서 CTC를 발견했으며 CTC 양성 환자 2명에서 5개월 이내에 작은 간세포암종 종양을 발견했습니다.69 따라서 CTC는 간세포암종을 예측하는 데 사용될 수 있지만 70 예측 바이오마커로 더 일상적으로 사용될 수 있습니다.
cfDNA와 마찬가지로 cfRNA는 다양한 시스템을 통해 혈류로 방출됩니다.말초 혈액의 이러한 분자는 기원의 암 조직을 나타냅니다.비침습적 방법으로 검출된 마커와 비교하여 cfRNA는 보다 동적으로 조절되고 조직 특이적이며 세포외 환경에서 풍부합니다.HCC에서 71개의 miRNA(miRNA)의 중요성과 진단적 가치는 많은 연구에서 보고되었습니다.miRNA는 표적 메신저 RNA(mRNA)의 번역을 억제하여 다양한 분자 생물학적 활성을 조절하는 내인성 비암호화 RNA(ncRNA)입니다.miRNA는 엑소좀에 캡슐화된 세포사멸체에 위치하지만 말초혈액의 혈청 단백질 및 지질에 안정적으로 결합할 수 있으며 간세포암종을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.microRNA는 간 재생, 지질 대사, 세포자멸사, 염증 및 간세포암종의 발생에 관여합니다.72 miR-21, miR-155 및 miR-221과 같은 발암성 miRNA는 HCC에서 잘 알려져 있습니다.특히 miR-21은 세포외기질에서 콜라겐 합성과 섬유화에 핵심적인 역할을 하며 조혈줄기세포를 활성화시켜 간암 발생을 촉진한다.72,73 HCC의 종양 억제 miRNA에는 miRNA-122, miRNA-29, Let-7 계열 및 miRNA-15 계열이 포함됩니다.Let-7 계열은 RAS 계열을 표적으로 하는 많은 종양 억제 miRNA로 구성됩니다.miR-15 패밀리에는 특정 mRNA에 대해 상보적인 서열을 갖는 miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 및 miR-497이 포함됩니다.또한, 긴 비암호화 RNA(lncRNA) 및 원형 RNA(cirRNA)도 간세포암종의 조기 스크리닝에 중요합니다.lncRNA는 mRNA 유사 ncRNA를 포함하여 가장 광범위한 ncRNA 부류를 나타내며 많은 인간 질병의 발병기전에 관여합니다.LncRNA는 간 미세 환경 및 만성 간 질환에서 조절 역할을 합니다.74 CircRNA는 또한 유전자 발현 조절에서 여러 기능을 가진 ncRNA의 한 부류입니다.최근에는 circRNA가 간세포암종 진단 도구로 고려되고 있습니다.
Circulating free RNA는 온도, pH 및 RNase에 대한 저항성을 포함하여 안정성이 뛰어나 표준 RNA 정제 방법을 사용하여 말초 혈액에서 fnRNA를 분리하는 작업을 덜 지루하게 만듭니다.가장 일반적으로 사용되는 방법에는 NGS, 마이크로어레이 및 RT-qPCR이 있습니다.NGS를 사용하면 게놈 전체에서 microRNA를 측정할 수 있습니다.그러나 이 방법은 비용이 많이 들고 분석이 표준화되지 않았습니다.대조적으로, RT-qPCR은 저렴하고 핵산을 빠르게 증폭하며 더 높은 감도, 더 높은 정확도, 더 넓은 동적 범위 및 더 적은 수의 샘플 필요와 같은 많은 이점을 제공합니다.마이크로어레이는 상보적 DNA 프로브와 표적 miRNA의 민감하고 특이적 혼성화를 기반으로 하는 miRNA 검출에 사용되는 또 다른 방법이지만 75 마이크로어레이 데이터 분석에는 시간이 많이 걸립니다.
순환하는 miR-122 및 Let-7은 고위험군의 초기 HCC, HBV 관련 전암성 결절 및 초기 HCC 환자의 마커를 진단하는 데 잠재적으로 유용한 것으로 보고되었습니다.76 Cai et al.Let-7 계열의 구성원(miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 및 miR-199a/b)이 만성 간염 환자의 HCC.Let-7 계열은 만성 C형 간염과 관련된 고위험군에서 간세포암종의 발병을 예측하기 위한 효과적인 대리 바이오마커 역할을 할 수 있습니다. 77 miR-122는 간경변증 환자에서 조기 간세포암종을 검출하는데 높은 진단 정확도를 가지고 있습니다.78 혈청 순환 MiR-107도 간세포암종의 초기 단계에서 평가되었으며, 79 고위험군에서 좋은 잠재력을 보여주었습니다.Zhou 등은 miRNA 패널(miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a 및 miR-801)이 HCC를 만성 B형 간염(CHB) 및 간경변과 구별할 수 있다고 보고했습니다. 민감도 79.1%, 75%, 특이도 76.4%, 91.1%였다.80 HBV 관련 간세포암종에서 miR150 수치가 간세포암종이 없는 만성 HBV 환자(민감도 79.1%, 특이도 76.5%)에 비해 유의하게 감소한 것으로 나타났습니다.-224는 건강한 대조군에 비해 간세포암종에서 증가했으며, 하위 그룹 분석은 HBV와 관련된 간세포암종 환자에서 더 높은 수치를 보여주었습니다.B형 간염 관련 간경변증 및 HCC 환자는 다른 대조군에서 HCC를 검출할 수 있는 7개의 차등적으로 발현된 siRNA를 포함하는 siRNA 분류기를 확인했습니다.조기 스크리닝 시 AUC 범위는 AFP 지원자보다 우수합니다.그들은 4개의 miRNA(miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p, miR-365a-3p)가 HCC 환자와 HCC가 없는 환자를 구별할 수 있음을 발견했습니다.5개의 과발현 miRNA(miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p 및 miR-148a-3p)는 특히 HCC, 간경변 및 CHB 바이오마커에서 잠재적인 HBV 감염으로 간주됩니다. miR-34a-5p는 간경변증의 바이오마커일 수 있으며,85 고위험군에서 간세포암종의 조기 스크리닝을 위한 잠재적 바이오마커일 수 있습니다.HCC에서 가장 많이 연구된 lncRNA는 간암(HULC)에서 고도로 활성화됩니다.다른 연구에 따르면 HCC 환자에서 순환하는 HULC는 이 lncRNA가 건강한 개인에 비해 HCC 환자에서 고도로 상향 조절되기 때문에 진단 마커로 사용될 수 있습니다.71,86 다른 lnRNA 중에서 LINC00152는 높은 AUC, 민감도 및 특이성으로 인해 최고의 진단 lncRNA로 간주됩니다.86 한 연구에서 LINC00152의 말초 혈액 발현은 정상적인 건강한 대조군에서 CHB 및 간경변 환자로 점차 증가했으며 마지막으로 HCC에서 가장 높았습니다.HCC 환자의 혈장에서 circSMARCA5의 발현에 대한 연구는 간염에서 간경변 및 전암 병변에 이르기까지 HCC에서 발현이 점진적으로 감소하는 것으로 나타났습니다.87 ROC 곡선의 분석은 간염 또는 간경변이 있는 환자를 HCC 환자, 특히 AFP 수준이 200ng/mL 미만인 환자와 구별하는 데 있어 이러한 circRNA의 가능성을 확인했습니다.또한 Zhu는 HBV 관련 HCC 환자의 혈장 샘플에서 13,617개의 순환 RNA를 분석하고 6개의 순환 RNA가 HCC 및 HBV 관련 간경변에서 다르게 발현됨을 확인하여 cRNA가 유익할 수 있음을 시사했습니다.간 질환, 경화증 환자와 관련된 그룹과 같은 고위험 그룹의 조기 스크리닝을 위한 마커.88
엑소좀은 직경이 40-160 nm인 막 소포입니다.여러 세포내 소포가 세포막과 융합하여 세포외 기질로 방출됩니다.그들은 지질, 단백질, RNA 및 DNA를 포함한 많은 활성 성분을 포함하고 HCC 및 비 HCC 세포 모두의 세포 간의 의사 소통에 중요한 역할을 합니다.89,90 엑소좀은 간세포 섬유아세포와 성상 세포, 면역 세포, 정상 간세포 및 간세포암종 세포를 활성화하여 간세포암종의 진행을 조절합니다.91 종양 미세 환경에서 종양 세포는 암 세포에서 미성숙 세포로 운반되는 많은 수의 엑소좀을 생성하며, 이는 차례로 종양 발생, 분해 및 세포 신호 전달에 관여합니다.92 연구에 따르면 엑소좀은 병리학적 과정에서 종양 유전자를 정상 세포로 전달할 수 있으며, 이는 종양 침습 및 전이의 메커니즘 중 하나일 수 있습니다.93 암 진행에서 엑소좀의 역할은 암 유형에 따라 역동적이고 특이적일 수 있습니다. 89 엑소좀은 인접하거나 멀리 있는 세포에 의해 내재화되어 세포간 통신 이온 및 세포 미세환경 상호작용에 관여할 수 있는 수용 세포의 다중 표적 유전자를 조절할 수 있습니다. 세포 신호 및 대사를 중재합니다.94 엑소좀화물 분자의 특성 및 동적 변화는 모체 종양 세포의 특성 및 동적 변화를 직접 반영하며,95 이는 암 진단 및 예후 뿐만 아니라 항암 요법에 대한 개별 반응 예측에 엑소좀 사용의 기초이기도 합니다. ..96
엑소좀을 분리하고 분석하기 위한 기존의 실험실 방법은 초원심분리, 여과, 크기 배제 크로마토그래피, 면역친화성 정제, 웨스턴 블로팅, 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA), PCR 및 흐름 분석을 포함하여 복잡하고 다단계이며 시간이 많이 걸립니다.마이크로/나노 기술을 사용하는 소형 시스템 및 랩온어칩 플랫폼은 엑소좀의 빠르고 편리한 제자리 분리를 위해 널리 개발되고 있습니다.나노입자 추적 분석(NTA)은 자성 나노입자 및 폴리하이드록시알카노에이트와 같은 방법을 포함하여 엑소좀의 크기와 농도를 특성화하는 데 널리 사용되는 방법입니다.미세유체 및 전기화학적 방법도 엑소좀을 높은 수율로 빠르게 검출할 수 있습니다.
엑소좀 단백질은 간세포암종 진단에 중요한 표지자입니다.Arbelaiz 연구에서 HCC 유래 엑소좀에서 98 RasGAP SH3 결합 단백질(G3BP)과 고분자 면역글로불린 수용체(PIGR)의 수준이 유의하게 상승했으며 두 단백질의 추정 복합 효능이 AFP보다 월등했다.철분 과부하는 간세포암종의 발병에 기여하는 중요한 요소입니다.Tseng은 hepcidin이 HCC에 대한 내성에 중요한 역할을 할 수 있다고 보고했습니다.99 간세포암종 환자의 혈청에서 추출한 엑소좀은 건강한 대응물보다 헵시딘 mRNA 변이체의 카피 수가 유의하게 더 많았으며, 이는 헵시딘이 간세포암종에 대한 새로운 진단 바이오마커일 수 있음을 시사합니다.100 HCC에 의해 생성된 엑소좀의 14-3-3ζ 단백질은 T 세포 활성화, 증식 및 분화를 감소시킬 수 있고 T 세포를 조절 T 세포로 전환시켜 T 세포 고갈을 유발할 수 있습니다.101 이것은 HCC 종양 형성에 기여할 수 있는 102 면역 감시로부터 종양 회피를 조사하는 여러 연구에 의해 뒷받침됩니다.
혈장 또는 혈청에 ecRNA가 존재하는 것 외에도 RNA가 풍부한 엑소좀은 초기 종양 스크리닝에서 비침습적 실시간 병기결정 및 종양 진화 및 치료에 대한 반응을 결정하는 데 사용할 수 있습니다.혈청 내 엑소좀 miRNA-21의 수준은 HCC 그룹에서 CHB 그룹보다 2.21배 높았고, HCC 그룹에서는 건강한 인구보다 5.57배 높았다.Wang 연구에서 엑소좀은 AUC 값이 0.83(95% CI 0.74-0.93) 및 0.94(95% CI 0.88-1.00)인 간경변 환자에 비해 간세포암종을 유의하게 증가시켰습니다.104 얻은 데이터는 종양 형성 및 HCC 진행의 조절에 특정 엑소좀 화물 분자의 관련성을 설명했습니다.105 miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 및 miR-26a의 혈청 발현은 일관적입니다.그리고 전이, miR21 수치는 건강한 대조군과 CHB 환자보다 간세포암종 환자에서 훨씬 더 높았다.102 LncRNA는 간세포암종에서 잠재적인 진단 가치가 있었다.연구에 따르면 HCC 환자의 혈청에서 추출한 엑소좀은 HCC가 없는 환자보다 LINC00161, LINC000635 및 형질전환 성장인자-β에 의해 ​​활성화된 lncRNA의 수준이 유의하게 더 높으며 이러한 lncRNA는 TNM 병기 및 종양 부피와 강하게 연관되어 있습니다.110 Conigliaro et al.CD90+ 엑소좀은 높은 수준의 lncRNAH19를 발현하는 것으로 밝혀졌으며, 이는 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 방출 및 VEGF-R1 수용체 생성을 크게 증가시켜 혈관신생을 자극합니다.93 CircRNA는 엑소좀 ncRNA의 또 다른 유형입니다. 종 전반에 걸쳐 낮지만 안정적인 수준으로 발현되며, circRNA는 또한 세포 유형, 조직 유형, 발달 단계 및 조절 활동에 대한 특이성을 나타냅니다.111개의 circRNA는 초기 및 최소 침습 암에 대한 진단용 바이오마커입니다.112 최근 임상 시험에 따르면 HCC를 예측하는 개별 miRNA의 특이성은 이상적이지 않습니다.따라서 다중 분석(예: AFP와 조합된 miR-122 및 miR-48a)을 사용한 복잡한 검출은 초기 HCC의 식별 및 간경변으로부터 HCC의 분화를 개선할 수 있습니다.100
CHB 및 간경변증 환자는 간세포암종 발병의 가장 흔한 고위험군입니다.고위험군의 경우 지속적인 바이러스 반응이 이루어지면 간세포암종 위험도에 기반한 비용 효율적인 감시 전략을 개발해야 하며, 조기 검진이 높은 비용 효율성으로 간세포암종의 진단 및 치료를 개선하는 열쇠입니다2 ..암의 조기 검진 방법은 많은 한계가 있습니다. 대부분의 유형의 암에 대해 효과적인 조기 검진 방법이 개발되지 않았으며 일반적으로 순응도가 낮습니다.전통적인 조기 스크리닝 방법과 비교하여 액체 생검 기술은 샘플링의 용이성, panrac 검출, 우수한 샘플 재현성 및 종양 이질성에 대한 효과적인 반응과 같은 명백한 이점이 있습니다.액체 생검과 관련된 방법의 비용 효율성을 감안할 때 HCC 스크리닝에서의 사용은 일상적으로 테스트되지 않았습니다.분자 수준에서 정확한 검출의 발전에도 불구하고 유체 생검은 표적 환자에서 HCC를 검출하는 데 비용이 많이 들고 초음파 및 자기 공명 영상과 같은 특정 영상 절차에 비해 널리 사용되는 데 제한이 있습니다.113,114 그러나 이전 연구에 따르면 액체 생검은 QALY(quality-adjusted life years) 측면에서 상당한 이점이 있음을 보여주었습니다.115 위와 비인두의 초기 암종에서 액체 생검의 이점도 나타났습니다.116,117 현재의 견해는 액체 생검이 종양의 검출 및 진단에서 혈청 바이오마커 및 방사선학적 스크리닝을 보완할 수 있다는 것입니다.117 118
현재 문헌에 따르면, 유체 생검 기술은 간암에 대한 고위험군의 조기 검진에서 훨씬 더 높은 민감도와 특이성을 보여주었습니다.체액 생검의 유형에 관계없이 HCC를 HCC가 없는 고위험 개인과 구별할 수 있으며 고위험 및 건강한 개인 간의 차이가 분명하므로 조기 검진의 중요성을 시사합니다.ctDNA는 반감기가 짧고 간세포암종을 검출하는 데 사용할 수 있으므로 종양 유래 cDNA의 모든 변화는 특히 작은 종양의 경우 종양 진행의 구체적인 실시간 증거를 제공할 수 있습니다.높은 수준의 ctDNA는 암의 발병 및 확산을 나타내며 진행 및 재발의 조기 지표입니다.또한 ctDNA의 결과를 바탕으로 환자 개개인에 맞는 치료와 추적관찰이 가능하다.119 특정 메틸화 부위는 간세포암종과 간경변성 결절의 조기 식별을 위해 AFP보다 더 나은 마커일 수 있습니다.절제 가능한 간세포암종의 경우 cDNA 수치가 높으면 미세혈관 침범과 수술 후 재발 및 전이가 있음을 나타냅니다.카피 수의 변화는 간세포암종 환자의 생존과 관련이 있습니다.cDNA 평가는 HCC의 전반적인 치료에 포함될 수 있으며 cDNA는 치료 조절의 효과적인 지표 역할을 할 수 있다고 가정할 수 있습니다.효능을 예측하고 약물 내성을 모니터링하기 위해 ctDNA의 특정 유전적 돌연변이를 기반으로 하는 마커가 임상 지침에 채택되었습니다.ctDNA 검사는 조기 스크리닝을 위한 가장 유용한 액체 생검 도구일 수 있습니다.CTC는 또한 고위험 HCC 그룹의 조기 선별에서 중요한 역할을 합니다.HCC 관련 CTC의 다양한 마커는 HCC의 발병, 발달 및 재발에 특히 중요합니다.막 소포로서 엑소좀은 특히 HCC 세포에서 세포간 통신에 관여합니다.순환하는 microRNA는 혈액에서 안정적이므로 HCC의 조기 스크리닝에 더 유용할 수 있습니다.점차적으로 엑소좀 단백질과 RNA가 풍부한 엑소좀이 발견되어 간세포암종에 대한 예측 효능이 확인되었습니다.흥미롭게도, HCC의 다른 병인은 다른 돌연변이와 연관될 수 있으므로 HCC의 다른 병인을 기반으로 조기 스크리닝을 위해 다른 바이오마커를 선택할 수 있습니다.120
그러나 현재의 체액 생검 기술은 안정성 측면에서 의심스럽고 HCC의 조기 스크리닝 또는 모니터링을 독립적으로 수행할 수 없지만 여전히 개별 스크리닝 및 진단을 보완할 수 있습니다.121 액체 생검의 한 형태로서, ctDNA, CTC, cfRNA 및 엑소좀 관련 AFP 또는 PIVKA-II의 검출 및 영상화는 HCC의 조기 진단 및 예후에 유망한 적용을 갖는다.그러나 ctDNA가 혈액으로 방출되는 정확한 메커니즘은 아직 밝혀지지 않았습니다.ctDNA의 기본적인 생물학적 특성을 밝히는 것은 마커로서의 사용을 용이하게 할 수 있습니다.순환에 있는 소량의 ctDNA와 엄격한 시료 취급 요구 사항은 HCC에서 cDNA 검출을 임상적으로 구현하는 데 어려움이 있습니다.또한 유전자 돌연변이에는 발암 물질을 정확하게 식별할 수 있는 특정 기능이 없습니다.여러 유전적 변이체와 체세포 변이체가 정상 조직에도 존재하기 때문에 체액 생검으로 확인된 유전적 돌연변이는 간세포암종의 조기 스크리닝에서 유용성이 제한될 수 있습니다.122 잘 정의된 유용한 유전자 표적과 비종양 DNA와 cDNA를 구별하는 데 도움이 되는 바이오마커의 한계는 cDNA 사용에서 가장 중요한 문제입니다.CTC의 검출을 위한 민감하고 특정한 마커의 유용성 부족.전이 가능성이 있는 생존 가능한 세포만 발견되었으며 CSC 농축 마커의 최적 조합이 불분명했습니다.배양을 위한 CTC의 분리 및 돌연변이 프로필의 평가도 어려운 작업입니다.엑소좀의 동정, 분리, 정제의 문제로 인해 구체적인 분자 기전이 아직 불분명하고 엑소좀과 간세포암종의 기전, miRNA, lncRNA, 단백질이 엑소좀으로 분류되는 방식에 대한 연구는 아직 심도가 미흡하다. , 엑소좀 흡수가 특정 유형의 과정인지 여부는 명확하지 않습니다.HCC의 진단 및 치료를 위한 엑소좀의 사용은 아직 전임상 단계에 있습니다.혈액 수집에 사용되는 튜브 유형, 혈액량, 샘플 저장 및 검출, 분리 및 농축과 같은 액체 생검 절차의 표준화 부족으로 인해 의료 센터 간의 관행 차이로 인해 일상적인 임상 실습에서 사용하지 못할 수 있습니다.HCC의 조기 스크리닝, 진단, 효능 평가 및 예측에서 액체 생검의 효능은 특히 고위험군에 대해 탐구되어야 합니다.액체생검 기술은 잠재력이 크며 가까운 장래에 간암의 임상에서 널리 활용될 것으로 기대된다.
1. 성 H., Furley J., Siegel RL 외.글로벌 암 통계 2020: GLOBOCAN은 185개국에서 36가지 유형의 암 발병률과 사망률을 추정합니다.CA 암 J Clin.2021;71(3):209-249.도이: 10.3322/caac.21660
2. 국가위생건강위원회 본부.원발성 간암의 진단 및 치료 기준(2022년판) [J].임상 간 질환 저널, 2022, 38(2): 288-303.도이: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z, et al.간세포암 진단 및 치료지침(2019년판).간 암.2020;9(6):682-720.도이: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K, et al.간세포암의 임상진료지침: 일본간질환학회, 2017(JSH-HCC 4차 가이드라인), 2019년 갱신.간 질환 저수지.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA 만성 간 질환의 액체 생검.앤 헤파토.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.액체 유방암 생검: 집중 검토.아치 패톨 연구소 Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG 간세포 암종 감시: 현재 모범 사례 및 미래 방향.위장병학.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. 유럽 연구 협회 L, 유럽 기구 R, C Therapeutics.임상 지침 EASL-EORTC: 간세포 암종의 치료.J 헤파린.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.작은 간세포 암종에서 유용한 혈청학적 표지자로서 AFP와 HCCR-1의 결합 분석: 전향적 코호트 연구.디스 마크.2012;32(4):265–271.도이: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, et al.B형 간염 바이러스 관련 간 질환에서 혈장 microRNA-125b의 차별적 발현과 B형 간염 바이러스 유발 간세포 암종의 진단 가능성.간 질환 저수지.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.간세포암에서 알파태아단백의 생물학과 중요성.간 int.2019;39(12):2214–2229.도이: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, et al.아시아 태평양 지역 간세포암 치료를 위한 임상 가이드라인: 2017 업데이트.국제 간 질환 기구.2017;11(4):317–370.도이: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei et al.중국 간세포 암종 환자에서 혈청 PIVKA-II 단독 또는 AFP와 조합의 진단 가치.디스 마크.2021;2021:8868370.도이: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.비소세포폐암 비혈장 체액생검: 종양에 더 가깝다!셀.2020;9(11).도이: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. 액체 생검: 현재 상태 및 미래 전망.치료 Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.도이: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, et al.액체 기반 암 생검: 임상 종양학의 다중 모드 진단 도구.Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.도이: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. 인간 혈장의 핵산.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.단편 크기 분석에 의한 순환 종양 DNA의 고급 검출.과학은 의학을 번역합니다.2018;10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.순환하는 종양 DNA 단편 길이.PLOS 유전자.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. 순환 종양 DNA: 액체 기반 암 생검에서 유망한 바이오마커.표적 종양.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.인간 악성 종양의 초기 및 후기 단계에서 순환하는 종양 DNA의 검출.과학은 의학을 번역합니다.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. 고형암의 돌연변이 예측 분석을 위한 액체 생검: 병리학자의 관점.제이바이오테크놀로지.2019;297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.순환 혈장 DNA 스크리닝을 통한 조기 종양 탐지: 과장인가 희망인가?벨기에 임상법.2020년;75(1):9-1 도이:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. 인간 간암 발생의 DNA 메틸화에 대한 간염 바이러스 및 노화의 영향.조직병리학.2010;25(5):647–654.도이: 10.14670/HH-25.647